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DOX阿霉素缓释分析——清析客户检测案例
类别：客户案例
624
2024-07-17
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2024-07-17
2024年1月15日，客服中心反馈浙江某高校客户有DOX阿霉素缓释分析以及DOX载体细胞共定位以及抗肿瘤活性机制的检测需求，接到反馈后，生物医学实验室工程师第一时间与客户进行详细沟通，情况如下：
客户背景
客户来自浙江某高校，有DOX阿霉素缓释分析以及DOX载体细胞共定位以及抗肿瘤活性机制的检测需求。
样品名称
W52/G3 DOX双载体
客户需求
1：研究W52/G3 DOX双载体对PH环境的敏感程度
2：研究W52/G3 DOX双载体药物缓释稳定性
3：研究W52/G3 DOX双载体对肿瘤细胞共定位
4：研究W52/G3 DOX双载体抗肿瘤细胞机制
解决方案
签订合同后，生物医学实验室立即开始制定研究方案。与客户充分讨论后，实验分组：如下
实验一：各样品与DOX区分情况；HPLC测试给定方法在贵企业实验室验证：
实验分组：
单载：W52、W56、G3
双载空载：W52/G3、W56/G3
双载包载DOX：W52/G3-Dox30、W56/G3-Dox30、W52/G3-Dox10、W56/G3-Dox10
药物（无载体）：DOX HCl
标准品：DOX HCl 标准品
实验步骤：
首先每个样品，一共8个样品，分别进样三针，每针10ul，得到HPLC谱图；
若有出峰时间与DOX接近的样品，请将其与DOX混合后进样，
查看谱图中除DOX的所有样品是否对DOX的出峰位置有影响（G3分子量接近）
若有影响需要调整测试条件；
标曲建立：DOX HCl 标准品建立5点标曲
HPLC测试方法：
第一稿：仪器：waters2695+2487；色谱柱：Welchrom VantageC18 5um 4.6x150mm
流动相：甲醇：水=70:30等度洗脱 需要加磷酸的；样品配置溶液也有注意事项；
检测波长：480nm；流速：1mL/min
柱温：25摄氏度
第二稿：色谱柱：Welchrom VantageC18 5um 4.6x150mm
流动相: 甲醇-乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾（40:15:45）；柱温：25度
荧光检测器检测波长：ex-495nm，em=560nm
实验二：不同pH条件下包载物中DOX释放含量的测定及DOX包载率测定与计算
实验二目的：测试药物在不同pH值下的释放量；测试及计算两个双载体的包载率
实验分组：
双载包载Dox：W52/G3-Dox30、W56/G3-Dox30、W52/G3-Dox10、W56/G3-Dox10
实验方法：
配置好不同pH值的溶液体系，pH 1-12，共12组。计算好加入到不同pH值的溶液体系中样品的体积及浓度
每个pH值样品可同时超声30min，室温下静置1h，取样前涡旋30s进行混匀，取混悬液经0.22μm滤膜过滤后，稀释50 or 100倍后（上机测试； pH=1～3请参照注意事项1执行；
注意事项及讨论结果：
pH=1～3时：因为色谱柱的耐受pH值是3~10，所以在测定pH1~3的时候，需要调节之后过滤，过滤完了以后，再调回pH=4或更高，然后再进样再测定；
需单独配置pH值单独测定：否则在一个瓶子里调节pH值的话，前面的和后面的会互相影响，
不同pH药物释放后测试时，会造成药物损失，所以改用稀释100倍上机；
实验三：肿瘤细胞共定位
通过肿瘤细胞的溶酶体探针，内质网探针等对细胞进行共孵育，通过激光共聚焦观察荧光信号，从而得到样品载体对肿瘤细胞的靶向性及DOX在细胞中的释放机制。
实验四：抗肿瘤细胞机制
通过流式细胞仪、ROS活性氧含量等，研究样品对肿瘤细胞的杀伤机制。
客户反馈
客户对前期沟通服务态度非常满意，对方案的制定、样品制备的缺点进行了充分讨论，做测试时积极向客户反馈实验进度，客户非常满意。
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