上海细胞自噬功效试验——清析客户检测案例

类别：客户案例 595 2022-09-16

2022年7月15日，客服中心反馈上海某生物科技有限公司有需求做山茶花提取物对促进细胞自噬的功效评价试验。生物实验室工程师第一时间与客户进行详细沟通，情况如下：

客户背景

某品牌是上海本土原创化妆品品牌，自2003年创立以来，致力于以中国传统草本为原材料，制作出安全的天然化妆品，开创山茶花润肤油。 2020年初，林清轩踩对“网红直播经济”的风口，依靠林清轩硬核的研发创新能力和研发、生产、销售的全产业链布局，以及不断更新迭代，受到消费者认可的产品，通过数字化全链路转型，全员直播，推动线下门店、线上销售、公司管理的全产业链的数字化改造，实现业绩逆袭。

样品名称

山茶花提取物

客户需求

客户需要检测化妆品原料山茶花提取物对细胞自噬是否有促进作用，从而验证化妆品原料对清理皮肤老废角质、抗衰老的功效。

解决方案

签订合同后，生物实验室先进行总体方案设计，林清轩生物科技有限公司是中国龙头护肤品品牌。为贴合产品实际运用情况，生物实验室优先选取人表皮成纤维细胞作为基本细胞进行自噬功效的试验。本次共设计三个细胞实验，分别从细胞水平、蛋白水平、细胞器水平来进行自噬效果评价，具体实验如下:

实验一：CCK8 细胞活性检测

1、在 96 孔板中配置 100uL 的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养 24 小时(37C，5% CO2).

2、向培养板加入 10uL 不同浓度的山茶花提取物和溶剂空白 0.5%DMSO，在细胞培养箱中培养 24h 后，向每孔加入 10uL cck8 溶液。将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时，用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度，计算细胞活率及化合物的 CC50 值。

实验二：总蛋白提取及定量

收集对数生长期的细胞，12000rpm,4℃，离心 10min，通过 BCA 法测定样品中蛋白含量。

实验三: western blot 检测细胞凋亡标志物 LC3 蛋白

将实验二提取的蛋白溶液按照 4:1 的比例加入 5*还原型蛋白上样缓冲液，western blot 分析经过山茶花提取物样品孵育后的细胞中，自噬标志性蛋白LC3的表达量。将实验组与对照组的结果进行数据分析，从蛋白水平上评价该样品对细胞的自噬促进效果。

实验四：透射电镜观察细胞自噬小体

取实验二的细胞样品进行透射电镜观察，离心收集细胞或细菌沉淀，去培养基加入电镜固定液 4℃重悬混匀固定 2-4h，4℃固定保存。制样后进行超模切片及染色处理，透射电子显微镜下观察，采集图像进行分析，观察自噬小体的形成。统计分析自噬小体形成数量和山茶花提取物的浓度关系。

客户反馈

客户对数据非常认可，后续继续进行化妆品原料抗衰老功效评价及抗糖化功效评价测试。

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